Die Membraninsertase YidC

Das Hüllprotein des E.coli Phagen M13 wird mit einer klassischen Signalsequenz synthetisiert, sodann aber unabhängig von dem bakteriellen Sec-Translokationsapparat in die innere Membran eingebaut. Die bisherigen Untersuchungen haben gezeigt, dass die beiden hydrophoben Bereiche (in der Signalsequenz und im maturen Teil) wahrscheinlich eine sog. Insertionsschlaufe bilden, in der diese beiden Regionen während des Membrandurchtrittes in kooperativer Weise interagieren. Dieser Insertionsmechanismus ermöglicht bestimmten M13 Procoat Mutanten höchstwahrscheinlich auch den Membraneinbau unabhängig vom Membranpotential. Um die Bildung der Insertionsschlaufe direkt untersuchen zu können, wurden durch Mutagenese an verschiedenen Positionen des Proteins Cystein-Reste eingebaut, die anschließend mit einer fluoreszierenden Gruppe modifiziert werden können. Damit sollte es über fluoreszenzspektroskopische, zeitaufgelöste Messungen möglich sein, den Abstand beider hydrophoben Bereiche zu verschiedenen Zeitpunkten des Membraneinbauprozesses zu bestimmen. Zusätzlich kann durch den Einsatz markierter Phospholipide der jeweilige Abstand des Proteins zu den Lipidmolekülen gemessen werden. Geplant ist auch, den Einbau der Insertionsschlaufe in planare Bilayermembranen zu untersuchen.